Генетический полиморфизм IL28B при хронических вирусных гепатитах

Резюме

Парентеральные вирусные гепатиты часто протекают с формированием цирроза печени. Точные механизмы, приводящие к развитию неблагоприятных исходов заболевания, неизвестны. В последние годы роль генетических детерминант в развитии многих системных заболеваний, в том числе связанных с циррозом печени, широко изучается.

Цель исследования - изучение частоты встречаемости полиморфизма гена интерлейкина 28В (IL28B) у пациентов при хроническом гепатите С (ХГС), хроническом гепатите В (ХГВ) и ХГВ + D как возможных прогностических маркеров прогрессирования патологического процесса в печени.

Материал и методы. Обследованы 127 больных: 40 человек с ХГВ, 23 - с XrD и 64 больных с ХГС с различной степенью выраженности фиброза. Сформированы 2 контрольные группы практически здоровых людей: местной этнической (n=28) и европеоидной (n=24). Методом TaqMan проведено генотипирование SNP в локусе rs8099917 гена IL28B.

Статистическую обработку данных проводили с определением средних величин показателей (М), расчета стандартных ошибок средних величин (m). При сравнении значений в двух группах для нормально распределенных показателей использовали t-критерий Стьюдента и точный критерий Фишера. Различия считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты и обсуждение. У практически здоровых людей аллель Т был мажорным, G - минорным. Частота генотипов отличалась со значительным превалированием (в 1,8 раза) ТТ (64,3%) генотипа над TG (35,7%) генотипом у представителей местной этнической группы. В европеоидной группе разница в гомозиготной аллели Т и гетерозиготной G была незначительной (45,8 и 54,2% соответственно). В группе пациентов с вирусными гепатитами выявлена большая доля людей с генотипом ТТ, в отличие от контрольных групп.

Заключение. Среди пациентов с вирусными гепатитами отмечена большая частота встречаемости генотипа ТТ, в отличие от контрольных групп. Возможно, у людей с генотипом ТТ имеется предрасположенность к заболеваниям вирусными гепатитами и хронизации инфекционного процесса. Генетический анализ может стать перспективным методом неинвазивной диагностики и прогнозирования исходов хронических вирусных гепатитов в цирроз печени.

Ключевые слова:вирус гепатита В; вирус гепатита D; вирус гепатита С; HBsAg; анти-HСV; цирроз печени; IL28B

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Вклад авторов. Все авторы внесли эквивалентный вклад в подготовку статьи.

Для цитирования: Абдукадырова М.А., Хикматуллаева А.С., Ибадуллаева Н.С., Мусабаев Э.И., Рахимова В.Ш., Ярмухамедова Н.А., Эгамова И.Н., Локтева Л.М. Генетический полиморфизм IL28B при хронических вирусных гепатитах // Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. 2022. Т. 11, № 2. С. 64-68. DOI: https://doi.org/10.33029/2305-3496-2022-11-2-64-68

Существуют различные генетические факторы, играющие важную роль в предрасположенности к развитию определенных заболеваний, исходам и ответу на лечение. Хорошо известно, что вклад различных генов в формирование генетической предрасположенности к возникновению ряда болезней существенно отличается в разных группах населения [1]. В ранее проведенных исследованиях выявлены генетические вариации в регионе гена интерлейкина 28В (IL28B), которые тесно связаны с исходами лечения и спонтанным разрешением патологического процесса при гепатите С (ГС) [2]. Наиболее частое проявление изменений структуры генов - однонуклеотидный полиморфизм (single nucleotide polymorphisms, SNP), обусловленный точечными мутациями в определенных позициях ДНК, для которых существуют различные варианты последовательностей в разных группах. Именно генетический полиморфизм генов определяет реакции, которые возникают у конкретного человека при действии на организм различных факторов [3].

При хроническом гепатите С (ХГС) прогрессирование заболевания обусловлено развивающимся фиброзом в печени, возникающим в ответ на длительный воспалительный процесс. До настоящего времени не установлены точные механизмы, приводящие к прогрессированию фиброза печени.

Частота генотипов гена IL28B в группах исследования

В научной литературе имеются результаты исследования полиморфизма гена IL28B при ХГС, хроническом гепатите В (ХГВ) [1, 2]. Проведены исследования полиморфизма гена IL28B у пациентов с естественным течением ХГС, включая процессы фиброза и воспалительных изменений в печени. Однако результаты изучения взаимосвязи полиморфизма гена IL28B с выраженностью патологических состояний печени у больных вирусными гепатитами остаются спорными [1].

Цель исследования - изучение частоты встречаемости полиморфизма гена IL28B у пациентов с при ХГС, ХГВ и ХГВ + D как возможных прогностических маркеров прогрессирования патологического процесса в печени.

Материал и методы

Обследованы 127 больных местной этнической группы с различной степенью выраженности фиброза печени для выявления частоты SNP в локусе rs8099917 гена IL28B: ХГВ (n=40), ХГВ+D (n=23) и ХГС (n=64). При проведении исследования было получено информированное согласие пациентов.

Возраст больных варьировал от 17 до 56 лет, в среднем составил 36,5±2,8 года. Этиологический диагноз устанавливали на основании результатов определения маркеров вирусных гепатитов (HBsAg, anti-HCV, anti-HDV) в сыворотке крови с помощью иммуноферментного анализа (ИФА), с применением набора реагентов "Диагностические системы" (Нижний Новгород, РФ).

Определение ДНК HВУ, РНК HCV и РНК HDV в плазме крови проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией с использованием набора реагентов "АмплиСенс®HBV-FL", "АмплиСенс®HCV-FL" и "АмплиСенс®HDV-FL" соответственно производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (РФ).

Всем больным проводили общепринятые биохимические исследования крови. В комплексное обследование больных включали определение индикаторов цитолитического, гепатодепрессивного, мезенхимально-воспалительного и холе-статического синдромов. Биохимические показатели выражали в международной системе единиц СИ.

Проводили генотипирование SNP, связанное с локусом rs8099917 гена IL28B. ДНК экстрагировали из цельной крови с помощью набора реагентов "ДНК-сорб-В" (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (РФ). Генотипирование SNP rs8099917 осуществляли методом TaqMan с использованием универсального набора реагентов для ПЦР (Applied Biosystems, Foster City, CA) и комбинированием со специальным раствором праймеров и проб для TaqMan SNP-генотипирования. Метод был адаптирован для тестирования с помощью "Rotor-Gene 6000" (Corbett Research, Австралия). Анализ проводили по конечной точке с помощью программного обеспечения "Rotor-Gene 6000" (Corbett Research, Австралия).

Для сравнения частоты носительства мутантного аллеля среди населения Республики Узбекистан обследовано 2 группы здоровых людей: местной этнической - 28 человек (11 мужчин и 17 женщин) и европеоидной - 24 (10 мужчин и 14 женщин).

Инструментальные методы: ультразвуковое исследование (УЗИ) печени, желчного пузыря и селезенки проводили с помощью аппарата "Haiying" (Китай). Стадию фиброза печени оценивали с помощью аппарата "FibroScan 502 S01462" (Франция).

Статистическую обработку данных проводили с определением средних величин показателей (М), расчета стандартных ошибок средних величин (m). При сравнении значений в двух группах для нормально распределенных показателей использовали t-критерий Стьюдента и точный критерий Фишера. Различия считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты и обсуждение

В результате изучения частоты носительства мутантного аллеля среди населения Республики Узбекистан установлено, что у здоровых людей аллель Т был мажорным, а G - минорным. Частота генотипов отличалась в двух группах со значительным превалированием ТТ (64,3%) генотипа над TG (35,7%) генотипом у местной этнической группы. В европеоидной группе разница в частоте гомозиготного аллеля Т и гетерозиготного G была незначительной (45,8 и 54,2% соответственно). Исследование здоровых людей местной этнической группы выявило, что частота встречаемости генотипов по SNP локуса rs8099917 гена IL28B составила TG - 28,6%, TT - 71,4%. Эти данные были использованы для дальнейшего анализа.

Частота встречаемости ТТ генотипа была выше у больных хроническими гепатитами, в отличие от здоровых людей (см. рисунок), хотя статистически значимых различий не обнаружено.

При сравнении частоты встречаемости генотипов IL28B у больных ХГВ и ХГВ + D достоверных различий не выявлено (см. рисунок). Анализ полученных данных показал, что генотип GG в исследуемых группах отсутствовал.

Частота генотипов гена IL28В в группах исследования

При ХГВ, ХГВ + D и ХГС генотипы представлены в основном гомозиготными аллелями Т (85,0; 87,0 и 76,6% соответственно). У 64 больных ХГС независимо от генотипа вируса (1-3-й генотипы) анализ SNP rs8099917 гена IL28B показал, что в данном исследовании аллель Т также был мажорным, а G - минорным. У больных ХГС значительно превалирует ТТ генотип (76,6%), чем генотип TG (23,4%), р<0,001, что соответствовало соотношению распределения аллелей генотипов у больных с ХГВ и ХГВ + D.

Хронические вирусные гепатиты являются основной причиной тяжести течения и исхода в цирроз печени (ЦП), поэтому изучение предикторов их прогрессирования является важной задачей [4, 5]. Распознавание патологии печени представляет определенные трудности из-за скудной клинической картины. Проявления заболевания могут варьировать от полностью бессимптомной клинической картины или легких признаков до тяжелых клинических проявлений [6-8]. Установлено, что с повышенным риском развития ЦП связаны определенные факторы вируса и организма инфицированного [9]. В последние годы активно ведется поиск генетических детерминант в качестве ранних маркеров риска прогрессирования заболевания печени у больных ХВГ. Известно, что полиморфизм генов отвечает за реакции, которые возникают у конкретного человека при воздействии на организм различных факторов. Была доказана значимость полиморфизмов гена IL28B как предиктора достижения устойчивого вирусологического ответа (УВО) при лечении ХГС. В 2009 г. Y. Tanaka и соавт. при обследовании местного этнического населения с генотипом 1 HCV обнаружили в 19-й хромосоме вблизи гена IL28B дополнительную полинуклеотидную последовательность rs8099917, среди аллелей которой аллель Т был мажорным, а G - минорным [10]. Доказано, что генетические вариации гена IL28B являются предикторами достижения УВО. У больных с rs8099917 ТТ генотипом эффективность терапии интерферона (ИФН) α + рибавирин была выше, чем у пациентов с GT и GG генотипами. Были выявлены генетические вариации SNP в регионе гена IL28B, которые тесно связаны с индуцированным лечением и спонтанным разрешением ГС [11].

В данном исследовании у здоровых людей аллель Т был мажорным, а G - минорным. Частота генотипов отличалась превалированием (в 1,8 раза) ТТ (64,3%) генотипа над ТG (35,7%) генотипом у людей местной этнической группы (р<0,05). В европеоидной группе разница в гомозиготном аллеле Т и гетерозиготном G была незначительной (45,8 и 54,2% соответственно).

В группе больных вирусными гепатитами также отмечено превалирование доли ТТ генотипа в сравнении с группой здоровых людей, хотя статистически значимых различий не было обнаружено. При ХГВ, ХГВ + D и ХГС генотипы пациентов представлены в основном гомозиготными аллелями Т (85,0; 87,0 и 76,6% соответственно).

Заключение

Частота генотипов у здоровых людей местной этнической и европеоидной групп населения отличалась значительным превалированием ТТ (64,3%) генотипа над ТG (35,7%) генотипом у людей местной этнической группы (р<0,05). У здоровых людей европеоидной группы разница в гомозиготном аллеле Т и гетерозиготном G была незначительной (45,8 и 54,2% соответственно).

У больных хроническими вирусными гепатитами частота встречаемости ТТ генотипа была также выше, но без статистически значимых различий. Не найдено достоверных различий в распределении генотипов между группами больных ХГС, ХГВ и ХГВ + D.

ЛИТЕРАТУРА

1. Jiao X.L., Gao Y.T., Jing L. et al. Studies on the relationship between polymorphism of IL28B rs8099917 and the outcome of HBV infection // Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi. 2011. Vol. 32, N 11. P. 1143-1147. (in Chinese)

2. Rauch A., Kutalik Z., Descombes P. et al. Genetic variation in IL28B is associated with chronic hepatitis C and treatment failure - a genome-wide association study // Gastroenterology. 2010. Vol. 138, N 4. P. 1338-1345.

3. Юшук Н.Д., Знойко О.О., Балмасова И.П., Федосеева Н.В., Шмелева Е.В., Дудина К.Р. и др. Иммуногенетические предикторы быстрого вирусологического ответа на противовирусную терапию больных хроническим гепатитом С // Терапевтический архив. 2012. Т. 84, № 11. С. 11-17.

4. Khodjaeva M., Ibadullaeva N., Khikmatullaeva A., Joldasova E., Ismoilov U., Colombo M. et al. The medical impact of hepatitis D virus infection in Uzbekistan // Liver Int. 2019. Vol. 39, N 9. P. 2077-2081. DOI: https://doi.org/10.1111/liv.14243

5. Khodjaeva M., Ibadullaeva N., Khikmatullaeva A., Joldasova E., Said S., Shahnoza A. et al. Hepatitis D virus in Uzbekistan // Lancet Gastroenterol. Hepatol. 2020. Vol. 5, N 3. P. 238-240. DOI: https://doi.org/10.1016/S2468-1253(19)30350-4

6. Хикматуллаева А.С., Абдукадырова М.А., Асилова М.У. Клинические аспекты цирроза печени вирусной этиологии // Медицина (Алматы). 2018. № 10. С. 39-44.

7. Абдукадырова М.А., Хикматуллаева А.С. Предикторы формирования ранних осложнений у больных хроническим гепатитом В и В с дельта агентом с исходом в цирроз печени // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2019. Т. 24, № 4. C. 193-198. DOI: https://doi.org/10.18821/1560-9529-2019-24-4-193-198

8. Абдукадырова М.А., Хикматуллаева А.С., Ходжаева М.Э., Кан Н.Г. Зависимость тяжести поражения печени от репликативной активности вируса гепатита В и Д // Эпидемиология и инфекционные болезни.2018; 23(5): 234-238. DOI: http://dx.doi.org/10.1882/1560-9529-2018-23-5-234-238

9. Khikmatullaeva A.S., Abdukadirova M.A., Ibadullaeva N.S., Asilova M.U., Kan N.G. Importance of high viral load indicators as a factor of progression of chronic hepatitis В to liver cirrhosis // Eur. J. Biomed. Pharm. Sci. 2018. Vol. 5, N 7. P. 699701

10. Tanaka Y., Nishida N., Sugiyama M. et al. Genome-wide association of IL28B with response to pegylated-α and ribavirin in the rapе for chronic hepatitis C // Nat. Genet. 2009. N 41. P. 1105-1109.

11. Negro F. Hepatitis C virus and liver steatosis is it the virus? Yes it is, but not always // J. Hepatol. 2002. Vol. 36. P. 1050-1052.

Материалы данного сайта распространяются на условиях лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License («Атрибуция - Всемирная»)

ГЛАВНЫЙ РЕДАКТОР
Горелов Александр Васильевич
Академик РАН, доктор медицинских наук, заведующий кафедрой инфекционных болезней и эпидемиологии НОИ «Высшая школа клинической медицины им. Н.А. Семашко» ФГБОУ ВО «Российский университет медицины» Минздрава России, профессор кафедры детских болезней Клинического института детского здоровья им. Н.Ф. Филатова ФГАОУ ВО Первый МГМУ им И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), заместитель директора по научной работе ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (Москва, Российская Федерация)

Журналы «ГЭОТАР-Медиа»