Показатели клеточного и гуморального иммунитета дошкольников с инфекционным мононуклеозом при первичном инфцировании и реактивации Эпштейна-Барр вирусной инфекции

Резюме

В научной литературе недостаточно информации об особенностях иммунологических сдвигов у детей с учетом критических периодов формирования иммунной системы. Инфекционный мононуклеоз (ИМ) при первичной Эпштейна-Барр вирусной инфекции (пЭБВИ) с благоприятным течением характеризуется в остром периоде повышением содержания CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, HLA-DR+, CD95+, CD20+-Лф, сывороточных иммуноглобулинов и провоспалительных цитокинов. При манифестной реактивации ЭБВИ (рЭБВИ) происходит разбалансировка цитокиновой системы с уменьшением значительного числа субпопуляций лимфоцитов, падением функциональной активности нейтрофилов, накоплением CD38+-лимфоцитов, IgM и мелких циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

Цель - сравнение иммунного ответа у детей 3-6 лет с ИМ при пЭБВИ и рЭБВИ.

Материал и методы. По результатам исследования крови методами иммуноферментного анализа и полимеразной цепной реакции сформировано 2 группы пациентов: 18 детей с пЭБВИ, 14 детей с ИМ в результате рЭБВИ. Статистическую обработку результатов проводили с использованием параметрических и непараметрических методов в программе Statistica 10.0.

Результаты и обсуждение. Выявлены четкие различия реакции иммунной системы детей 3-6 лет при пЭБВИ и рЭБВИ. При первичном инфицировании отмечена выраженная активация клеточного звена иммунного ответа с увеличением содержания CD7+, CD8+, CD16+, CD11b+, CD54+ и HLA-DR+Лф. Реакция гуморального звена иммунитета на пЭБВИ характеризовалась дефицитом В-лимфоцитов CD20+, CD23+, сывороточных IgA и IgG, на фоне выраженного увеличения CD38+, IgM и ЦИК. При реактивации ЭБВИ определялось значимое снижение относительно группы контроля и пЭБВИ большинства исследуемых показателей клеточного иммунного ответа (CD7+, CD3+, CD8+Лф, CD54+, HLA-DR+Лф). Наряду с этим при рЭБВИ выявлено увеличение CD4+/СD8+, умеренное повышение уровня сывороточного IgA и мелких ЦИК.

Заключение. У детей 3-6 лет с ИМ в результате пЭБВИ и рЭБВИ обнаружены разнонаправленные реакции иммунной системы. При пЭБВИ зафиксировано напряжение клеточного иммунитета, при рЭБВИ - депрессия клеточных факторов и увеличение CD4+/CD8+. Данные изменения установлены у детей, находящихся в четвертом критическом периоде формирования иммунной системы. Сочетание этого фактора с выявленной депрессией клеточного звена иммунитета позволяет высказать предположение, что дети 3-6 лет с рЭБВИ составляют группу повышенного риска возникновения хронического течения ИМ.

Ключевые слова:Эпштейна-Барр вирус; инфекционный мононуклеоз; дети; реактивация; лимфоциты; иммунный ответ

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Вклад авторов. Концепция и дизайн исследования - Дроздова Т.Г.; сбор и обработка материала - Антонова М.В., Чехова Ю.С., Огошкова Н.В.; статистическая обработка данных - Антонова М.В., Ханипова Л.В., Бельтикова А.А.; написание текста - Кашуба Э.А., Антонова М.В.; редактирование - Любимцева О.А.; утверждение окончательного варианта статьи - Кашуба Э.А., Рычкова О.А.; ответственность за целостность всех частей статьи - Антонова М.В.

Для цитирования: Кашуба Э.А., Антонова М.В., Дроздова Т.Г., Рычкова О.А., Любимцева О.А., Ханипова Л.В., Огошкова Н.В., Чехова Ю.С., Бельтикова А.А. Показатели клеточного и гуморального иммунитета дошкольников с инфекционным мононуклеозом при первичном инфицировании и реактивации Эпштейна-Барр вирусной инфекции // Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. 2022. Т. 11, № 2. С. 57-63. DOI: https://doi.org/10.33029/2305-3496-2022-11-2-57-63

Доказано, что инфекционный мононуклеоз (ИМ) Эпштейна-Барр вирусной этиологии (ЭБВИ) является заболеванием с иммунопатологическим генезом [1-3]. Это в значительной мере определяет различные варианты исходов болезни. Первичный ЭБВИ (пЭБВИ) с благоприятным течением в остром периоде характеризуется повышением содержания CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, HLA-DR+, CD95+, CD20+-лимфоцитов, сывороточных иммуноглобулинов и провоспалительных цитокинов [4-10]. При реактивации ЭБВИ (рЭБВИ), по мнению С.А. Хмилевской, происходит разбалансировка цитокиновой системы с уменьшением относительного содержания субпопуляций лимфоцитов, падением функциональной активности нейтрофилов, накоплением CD38+, IgM и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в крови пациентов [11]. В возрастной структуре больных с различным течением ЭБВИ преобладают дети [12-14]. Однако в научной литературе нет исчерпывающей информации об особенностях иммунологических сдвигов с учетом критических периодов формирования иммунной системы на постнатальном этапе развития организма ребенка [15]. Критические периоды развития иммунобиологической реактивности ("верстовые столбы") - это периоды развития, когда на антигенное воздействие иммунная система может дать неадекватный или парадоксальный ответ, который может быть недостаточным для защиты или чрезмерным [16]. В структуре критических периодов жизни ребенка особое место принадлежит возрасту от 3 до 6 лет, когда отмечается серьезная перестройка гемопоэтического аппарата, характеризующаяся формированием физиологического "перекреста" нейтрофилов и лимфоцитов под контролем колониестимулирующих факторов иммунной системы [17]. Происходит медленное торможение лимфопоэза на фоне активации гранулоцитарного ростка и постепенный переход супрессорной формы иммунного ответа на хелперный, а также возникают "новые" взаимоотношения эндокринной и иммунной систем за счет повышения количества и экспрессии кортизоловых рецепторов лимфоцитов к гормонам надпочечников [16]. Подобное становление иммунной системы ребенка в четвертом критическом периоде жизни [18] продолжается достаточно долго и нередко сопровождается формированием многих хронических заболеваний [19].

Цель работы - сравнение иммунного ответа у детей 3-6 лет с ИМ при при пЭБВИ и рЭБВИ.

Материал и методы

В исследование были включены 32 ребенка 3-6 лет с ЭБВИ. Пациенты распределены на 2 группы: 1-я группа - 18 детей с пЭБВИ, 2-я группа - 14 детей с рЭБВИ. В сыворотке крови больных 1-й группы методом иммуноферментного анализа (ИФА) определяли иммуноглобулины класса М и G к белку капсида вируса (VCA IgM, VCA IgG) и иммуноглобулин класса G к раннему белку вируса (EA IgG). В сыворотке крови больных 2-й группы наряду с антителами к капсидному и раннему антигенам ЭБВ обнаруживали иммуноглобулины класса G к ядерному антигену вируса (EBNA IgG). Обследование пациентов проводили на 4-8-й дни болезни. Группу контроля составили 20 практически здоровых детей соответствующего возраста.

Критерии исключения: обнаружение маркеров активности других герпесвирусов; наличие симптоматики сочетанной инфекционной патологии; тяжелые сопутствующие хронические заболевания в стадии обострения; диффузные заболевания соединительной ткани, ревматическая патология, органические заболевания сердечно-сосудистой системы, поражение печени другой этиологии, первичные иммунодефициты; отказ законных представителей от участия ребенка в исследовании.

Комплексное иммунологическое обследование проводили на 1-й неделе при пЭБВИ и/или его реактивации. Оно включало иммунофенотипирование лимфоцитов крови на проточном лазерном цитофлуориметре "Fascan" (Becton Dickinson, США) с определением CD3+, CD4+, CD8+, CD11b+, CD16+, HLA-DR+-Т-лимфоцитов (ТОО "Сорбент", РФ) [20], определение концентрации сывороточных IgM, IgG, IgA методом радиальной диффузии в геле по Манчини [21], фагоцитарной активности нейтрофилов с латексом с оценкой фагоцитоза адгезии и фагоцитоза поглощения [22], определение метаболической активности нейтрофилов в спонтанном и активированном тестах восстановления нитросинего тетразоля (НСТ-тест) [23], оценку уровня ЦИК методом ИФА после осаждения 3,5; 5 и 7,5% раствором полиэтиленгликоля [24].

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием прикладных программ Microsoft Office и Statistica 10. Значения оцениваемых показателей выражали в виде медианы (Me), 25-го и 75-го квартилей [Q25; Q75]. Для обработки результатов исследования использовали критерий Манна-Уитни (для независимых выборок). Различия считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты и обсуждение

При комплексной оценке клеточного иммунитета у детей дошкольного возраста при первичной инфекции и рЭБВИ обнаружены статистически значимые разнонаправленные изменения содержания лимфоцитов.

В структуре основных субпопуляций Т-лимфоцитов у детей с пЭБВИ выявлено значимое увеличение количества CD7+-лимфоцитов по сравнению с группой контроля и рЭБВИ (табл. 1). Уровень CD7+-лимфоцитов у пациентов с рЭБВИ был выше показателей контрольной группы, но значимо ниже, чем у детей с пЭБВИ. Абсолютное содержание CD3+-Т-лимфоцитов максимально повышалось в группе детей с ИМ при пЭБВИ и вдвое превышало показатели у детей с рЭБВИ. Количество CD4+-Т-лимфоцитов, выполняющих хелперную функцию, имело тенденцию к повышению в обеих группах наблюдения в сравнении с контрольным показателем, разница была статистически незначима. Было выявлено значимо большее содержание цитотоксических CD8+-Т-лимфоцитов у детей при пЭБВИ в сравнении с группой контроля и реактивацией вируса. Статистически значимо увеличивалось количество клеток с киллерными функциями в группе с пЭБВИ в сравнении с контролем (CD16+- и CD11b+-Т-лимфоциты). Это может указывать на второстепенную роль неспецифических киллеров в содержании литической репликации вируса при рецидивировании инфекции и быть одной из причин манифестной рЭБВИ. Содержание маркера ранней активации CD54+ также существенно повышалось в периферической крови детей с пЭБВИ и рЭБВИ по сравнению с контрольными значениями.

Таблица 1. Маркеры дифференцировки и активации клеточного и гуморального звеньев иммунитета у детей 3-6 лет при инфекционном мононуклеозе (ИМ), вызванном первичной Эпштейна-Барр вирусной инфекцией (пЭБВИ) и ее реактивацией (рЭБВИ)

Примечание. * - при p≤0,05; ** - при p≤0,01; *** - p≤0,001 при сравнении с группой контроля; 5,19 [2,19; 10,05] - статистически значимые различия (p≤0,05) между показателями ИМ при пЭБВИ и рЭБВИ.

Выявлено увеличение содержания клеток поздней активации HLA-DR в группе с первичной ЭБВИ в сравнении с показателями у детей с рЭБВИ и контролем. На фоне уменьшения количества Т-лимфоцитов у пациентов с рЭБВИ Ме иммунорегуляторного индекса (ИРИ) составляла 1,13 [1,25; 1,34], что было статистически значимо больше в сравнении с пЭБВИ и группой контроля. Это косвенно свидетельствовало об избыточной активности Т-хелперов и ослаблении регулирующей функции Т-киллеров. Кроме этого, при рЭБВИ отмечалось уменьшение содержания лимфоцитов с маркером CD71+, тогда как при пЭБВИ прослеживалась тенденция по увеличению содержания данной субпопуляции лимфоцитов (см. табл. 1).

Оценка состояния гуморального звена иммунного ответа у детей при ЭБВИ выявила статистически значимое в сравнении с контролем уменьшение содержания В-лимфоцитов (CD20+) при пЭБВИ до 0,25 [0,17; 0,46] × 109/л и рЭБВИ до 0,60 [0,32; 0,64] × 109/л. Количество активированных В-лимфоцитов (CD23+) по сравнению со значением в группе контроля также снижались пЭБВИ - 0,22 [0,05; 0,33] × 109/л и рЭБВИ - 0,27 [0,04; 0,58] × 109/л. Эти изменения сопровождались повышением содержания плазматических клеток (CD38+) у детей обеих групп по сравнению с контролем (0,89 [0,76; 1,15] × 109/л). Количество плазматических клеток CD38+ при рЭБВИ (1,41 [0,56; 1,66]) × 109/л было значимо ниже в сравнении с группой пЭБВИ (-3,88 [2,15; 6,33] × 109/л) (см. табл. 1).

Значительные различия установлены при изучении содержания иммуноглобулинов. В группе с рЭБВИ сывороточный IgA был выше, IgM сопоставим с контрольным показателем, а IgG значимо ниже, чем при пЭБВИ (табл. 2). Подобное соотношение содержания иммуноглобулинов является нетипичным для длительно протекающего инфекционного процесса. Количество ЦИК при рЭБВИ повышалось преимущественно за счет ЦИК 7,5%, уровень которых по сравнению с содержанием в контрольной группе и группе детей с первичным инфицированием был значимо выше. Функция нейтрофилов по элиминации ЦИК по результатам спонтанного НСТ-теста доминировала при пЭБВИ, а при рЭБВИ была сопоставима с контрольными значениями. При этом резервная способность к фагоцитозу оставалась сохранной, что выражалось в сопоставимом увеличении стимулированного НСТ-теста в группе с пЭБВИ и рЭБВИ (см. табл. 2).

Таблица 2. Показатели неспецифического звена иммунитета у детей 3-6 лет при инфекционном мононуклеозе (ИМ), вызванном первичной Эпштейна-Барр вирусной инфекцией (пЭБВИ) и ее реактивацией (рЭБВИ)

Примечание. 5,9 [1,65; 7,9] - статистически значимые различия (p≤0,05) между показателями ИМ при пЭБВИ и рЭБВИ; * - при p≤0,05; ** - при p≤0,01; *** - p≤0,001 при сравнении с группой контроля. Расшифровка аббревиатур дана в тексте.

Заключение

У детей 3-6 лет иммунная система претерпевает четвертый критический период развития, при реактивации ЭБВИ было выявлено большое количество показателей, уровень которых статистически значимо отличался от значений в группе контроля и пЭБВИ. В частности, в сравнении с группой детей с первичным инфицированием были зафиксированы значимое снижение активности клеточного звена иммунного ответа (уменьшение CD3+, CD8+, HLA-DR+, CD38+Лф, увеличение CD4+/CD8+), преобладание специфического реагирования и присутствие в периферическом кровеносном русле большого количества мелких ЦИК. Выявленная депрессия клеточных факторов защиты на фоне естественного снижения числа лимфоцитов в четвертом критическом периоде может служить причиной недостаточного сдерживания латентной репликации вируса с переходом в литическую и развитием клинической манифестации ЭБВИ. Эта иммунологическая особенность детского организма объясняет частоту клинической манифестации при рЭБВИ у детей младше 6 лет.

ЛИТЕРАТУРА

1. Odumade O.A., Hogquist K.A., Balfour H.H. Progress and problems in understanding and managing primary Epstein-Barr virus infections // Clin. Microbiol. Rev. 2011. Vol. 24, N 1. P. 193-209. DOI: https://doi.org/10.1128/CMR.00044-10

2. Thorley-Lawson D.A., Hawkins J.B., Tracy S.I., Shapiro M. The pathogenesis of Epstein-Barr virus persistent infection // Curr. Opin. Virol. 2013. Vol. 3, N 3. P. 227-232. DOI: https://doi.org/10.1016/j.coviro.2013.04.005

3. Хохлова З.А., Попова О.А., Чуйкова К.И. и др. Инфекционный мононуклеоз у детей: особенности течения заболевания в зависимости от видов противовирусной терапии // Журнал инфектологии. 2017. Т. 9, № 3. С. 67-74. DOI: https://doi.org/10.22625/2072-6732-2017-9-3-67-74

4. Горейко Т.В., Калинина Н.М., Дрыгина Л.Б. Роль цитокинов в патогенезе хронической инфекции, вызванной вирусом Эпштейна-Барр // Цитокины и воспаление. 2011. Т. 10, № 4. С. 96-100.

5. Симованьян Э.Н., Харсеева Г.Г., Ким М.А. Роль "цитокиновой среды" в иммунопатогенезе инфекционного мононуклеоза Эпштейна-Барр вирусной этиологии // Современные тенденции развития науки и технологий. 2016. № 7-3. С. 32-37.

6. Чечина О.Е., Биктасова А.К., Сазонова Е.В. и др. Роль цитокинов в редоксзависимой регуляции апоптоза // Бюллетень сибирской медицины. 2009. Т. 8, № 2. С. 67-72.

7. Колесник Я.В., Жаркова Т.С., Ржевская О.А., Кварацхелия Т.М., Сорокина О.Г. Клинико-иммунологические критерии неблагоприятного течения инфекционного мононуклеоза у детей // Georgian Medical News. 2018. № 278. С. 132-138.

8. Симованьян Э.Н., Денисенко В.Б., Григорян А.В. и др. Эпштейна-Барр вирусная инфекций у детей: совершенствование программы диагностики и ле- чения // Детские инфекции. 2016. Т. 15, № 1. С. 15-24.

9. Sulik A., Oldak E., Kroten A., Lipska A., Radziwon P. Epstein-Barr virus effect on frequency of functionally distinct T cell subsets in children with infectious mononucleosis // Adv. Med. Sci. 2014. Vol. 59, N 2. P. 227-222. DOI: https://doi.org/10.1016/j.advms.2014.04.003 PMID: 25051418.

10. Azzi T., Lünemann A., Murer A., Ueda S., Béziat V., Malmberg K.J. et al. Role for early-differentiated natural killer cells in infectious mononucleosis // Blood. 2014. Vol. 124, N 16. P. 2533-2543. DOI: https://doi.org/10.1182/blood-2014-01-553024 PMID: 25205117; PMCID: PMC4199955

11. Хмилевская С.А. Эпштейна-Барр вирусный мононуклеоз: клинико-динамические особенности различных вариантов инфекции // Саратовский научно-медицинский журнал. 2010 Т. 6, № 3. С. 570-574.

12. Rostgaard K., Balfour H.H. Jr, Jarrett R., Erikstrup C., Pedersen O., Ullum H. et al. Primary Epstein-Barr virus infection with and without infectious mononucleosis // PLoS One. 2019. Vol. 14, N 12. Article ID e0226436. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0226436

13. Winter J.R., Taylor G.S., Thomas O.G., Jackson C., Lewis J.E.A., Stagg H.R. Predictors of Epstein-Barr virus serostatus in young people in England // BMC Infect. Dis. 2019. Vol. 19, N 1. P. 1007. DOI: https://doi.org/10.1186/s12879-019- 4578-y

14. Monteiro T.A.F., Costa I.B., Costa I.B., Corrêa T.L.D.S., Coelho B.M.R., Silva A.E.S. et al. Genotypes of Epstein-Barr virus (EBV1/EBV2) in individuals with infectious mononucleosis in the metropolitan area of Belém, Brazil, between 2005 and 2016 // Braz. J. Infect. Dis. 2020. Vol. 24, N 4. P. 322-329. DOI: https://doi.org/10.1016/j.bjid.2020.06.004

15. Лядова Т.И., Волобуева О.В., Гололобова О.В. и др. Типы иммунного ответа при различных формах Эпштейна-Барр вирусной инфекции // Міжнародний медичний журнал. 2017. Т. 23, № 1. С. 70-76.

16. Снимщикова И.А. Курс лекций по прикладной иммунологии. Орел : ОГУ, 2015. 120 с.

17. Титов Л.П., Кирильчик Е.Ю., Канашкова Т.А. Особенности строения, развития и функционирования иммунной системы детского организма // Медицинские новости. 2009. № 5. С. 7-16.

18. Козыро И.А., Батян Г.М., Сукало А.В. Клиническая иммунология в практике врача-педиатра : учебно-методическое пособие. Минск : БГМУ, 2011. 32 с.

19. Зайцева О.В. Инфекция и иммунитет: актуальные вопросы в практике педиатра // Детские инфекции. 2015. Т. 14, № 1. С. 36-43.

20. Байдун Л.А., Зурочка А.В., Хайдуков С.В. и др. Стандартизованная технология "Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлюориметров-анализаторов" (проект) // Медицинская иммунология. 2012. Т. 14, № 3. С. 255-268.

21. Mancini G., Garbowara A.O., Hereman J.F. Immunochemical guantitation of antigents by single radial immunodiffusion // Immunochemistry. 1965. Vol. 2. Р. 235-236.

22. Потапова Т.С., Хрустиков B.C., Демидова Н.В. и др. Изучение поглотительной способности нейтрофилов крови с использованием инертных частиц латекса // Проблемы гематологии. 1977. № 9. С. 58-59.

23. Гордиенко С.М. Сравнительная оценка результатов теста восстановления нитросинего тетразолия при микроскопическом и спектрофотометрическом вариантах метода с различными солями тетразолия // Лабораторное дело. 1983. № 2. С. 21-24.

24. Осипов С.Т., Еремеев В.В. Методы определения ЦИК // Лабораторное дело. 1983. № 11. С. 3-7.

ГЛАВНЫЙ РЕДАКТОР
ГЛАВНЫЙ РЕДАКТОР
Ющук Николай Дмитриевич
Академик РАН, профессор, почетный заведующий кафедрой инфекционных болезней и эпидемиологии, президент ФГБОУ ВО "Московский государст­венный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова" Минздрава России, член Правления Национального научного общества инфекционистов.
РОСМЕДОБР 2021
Вскрытие
Медицина сегодня
"Бронхоэктазы: муковисцидоз и не только..."

Уважаемые коллеги, приглашаем принять участие в конференции "Бронхоэктазы: муковисцидоз и не только..." в Воронеже, которая состоится с 23 по 24 июня Организаторы: · Общероссийская общественная организация "Российское общество медицинских генетиков"; · НМИЦ...

7-8 июня 2022 года "Фёдоровские чтения" объединили молодых талантливых офтальмологов

7-8 июня 2022 года "Фёдоровские чтения" объединили молодых талантливых офтальмологов Летний сезон Общество офтальмологов России открыло Всероссийской научно-практической конференцией с международным участием "Фёдоровские чтения"! Это одно из немногих российских...

RHINOLOGY WORLD CONGRESS 2022 IRS-ISIAN

На 2022 год запланирован новый этап в развитии отечественной ринологии - впервые в России будет проведен RHINOLOGY WORLD CONGRESS 2022 IRS - ISIAN . Это грандиозное мероприятие объединит два ключевых события мировой ринологической науки: 22-й Конгресс Международного...


Журналы «ГЭОТАР-Медиа»