Развитие учения о риккетсиях и риккетсиозах

• Тарасевич Ирина Владимировна

РезюмеПредставлены результаты исследований лабораторий экологии и молекулярной биологии и генетики риккетсий ФГБУ "Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. акад. Н.Ф. Гамалеи" Минздрава России с 1973 г. по настоящее время.

Ключевые слова:микробиология, иммунология, экология риккетсий, эпидемиология риккетсиозов, эпидемический сыпной тиф, болезнь Брилла-Цинссера, клещевой сыпной тиф Северной Азии (клещевой риккетсиоз), астраханская пятнистая лихорадка, дальневосточный клещевой риккетсиоз, лихорадка цуцугамуши, ку-лихорадка, болезнь кошачьей царапины, молекулярная биология и генетика риккетсий

Понятие "учение о риккетсиях и риккетсиозах" пред­ложил бразильский ученый Энрике да Роша Лима (Rocha Lima). Он вместе с чешским паразитологом Станиславом фон Провачеком проводил исследования по эпидемическому сыпному тифу, его возбудителю и пере­носчику в Гамбургском институте тропических болезней во время Первой мировой войны. В то время эпидемия сыпного тифа в Восточной Европе переросла в пандемию: тысячи больных сыпным тифом были в армии, среди воен­нопленных и гражданского населения. Проблема сыпного тифа приобрела большое значение. К несчастью, оба ис­следователя, работая с платяными вшами в лаборатории, заразились сыпным тифом; да Роша Лима выздоровел, а Провачек погиб. Будучи опытным микробиологом, да Роша

Лима ввел в систему микроорганизмов название Rickettsia для возбудителя сыпного тифа, выделенного американским ученым Г.Т. Риккетсом, и назвал его Rickettsia prowazekii (1916) в честь обоих погибших от сыпного тифа ученых. В дальнейшем количество представителей семейства риккетсий увеличивалось, а входящие в него бактерии оказа­лись возбудителями тяжелых заболеваний человека, часто с летальным исходом.

В России во время эпидемии эпидемического сыпного тифа, по разным данным, переболели от 10 до 25 млн че­ловек.

Одним из первых изучение риккетсиозов в России на­чал Павел Феликсович Здродовский, переболевший в годы Первой мировой войны тяжелой формой сыпного тифа.

В конце 1940-х гг. он возглавил отдел сыпного тифа и других риккетсиозов в Институте эпидемиологии и микробиологии им. акад. Н.Ф. Гамалеи и около 40 лет работы посвятил ис­следованию риккетсий и риккетсиозов.

К тому времени в мире были описаны пятнистая лихо­радка Скалистых гор, марсельская лихорадка, крысиный сыпной тиф, лихорадка цуцугамуши и выявлена рецидивная форма сыпного тифа - болезнь Брилла-Цинссера. В бывшем СССР были известны эпидемический сыпной тиф и болезнь Брилла-Цинссера.

В 1939 г. был описан клещевой сыпной тиф Северной Азии и выделен возбудитель в Красноярском и Алтайском краях [1]. Описана марсельская лихорадка в Крыму [2].

Перед Павлом Феликсовичем стояли задачи всесторон­него изучения риккетсиозов. Необходимо было уточнить распространение уже известных форм, организовать пои­ски новых риккетсиозов, в том числе на новых территориях. Были выделены возбудители крысиного сыпного тифа и марсельской лихорадки в Закавказье (Е.М. Голиневич), иденти­фицирован возбудитель клещевого сыпного тифа Северной Азии и выделен в семейство Rickettsiaceae как новый вид Dermacentor oxenus sibirica [3].

Были выделены и изучены возбудители везикулезного риккетсиоза и его переносчика - гамазового клеща [1, 3, 4]. Начато изучение ку-лихорадки и ее возбудителя [1, 3, 5, 6].

Дана оценка роли каждого риккетсиоза в инфекцион­ной патологии человека и предложены меры профилактики всех риккетсиозов - разработана живая вакцина против ку-лихорадки из аттенуированного штамма М коксиелл Бернета; живая комбинированная вакцина из ослабленного штамма Е риккетсий Провачека - ЖКСВЕ. Е.М. Голиневич и И.Б. Фрязинова [3] разработали химическую сыпнотифоз­ную вакцину против сыпного тифа, была создана антибиовакцина против всех риккетсиозов [3].

Вакцины против ку-лихорадки из аттенуированного штамма М коксиелл Бернета и эпидемического сыпного тифа - ЖКСВЕ продолжают выпускаться Пермским филиа­лом НПО "Микроген".

У Павла Феликсовича не ослабевал интерес к изучению возбудителя сыпного тифа, в частности к его вирулентности, которую изучала Н.М. Балаева, она же провела очень важ­ное исследование - повышение вирулентности вакцинного штамма Е риккетсий Провачека при пассировании в легких белых мышей [3].

Многочисленные труды П.Ф. Здродовского, его соратни­ков и учеников легли в основу монографии "Учение о риккетсиях и риккетсиозах" [1]. Эта монография до сих пор яв­ляется настольной книгой для риккетсиологов.

После ухода из жизни П.Ф. Здродовского в 1973 г. отдел сыпного тифа и других риккетсиозов был расформирован. Научную работу продолжила лаборатория экологии риккетсий (руководитель - И.В. Тарасевич) в рамках отдела инфекций с природной очаговостью. Была создана новая лаборатория молекулярной биологии и генетики риккетсий (руководитель - Н.М. Балаева) в отделе микробиологии.

Руководство исследований по риккетсиозам взял на себя С.В. Прозоровский, который стал председателем Все­союзного центра по риккетсиозам. Были образованы также филиалы центра в Ленинградском НИИ им. Луи Пастера, Львовском НИИЭМ, Пермском НИИВС, Омском НИИПИ и Таш­кентском НИИЭМ, а также опорные базы в ряде санитарно-эпидемиологических станций (СЭС).

В соответствии с положением о центре приоритет был отдан эпидемиологии и диагностике риккетсиозов, про­водимых в лаборатории экологии риккетсий и под ее эги­дой. В 1982 г. лаборатория экологии риккетсий получила статус референс-центра Всемирной организации здраво­охранения (ВОЗ) по риккетсиозам (директор - И.В. Тарасевич), в 1992 г. на ее базе был создан Российский центр по риккетсиозам (председатель - И.В. Тарасевич). Задачи исследований лаборатории экологии риккетсий и Центра совпадали, а статус референс-центра ВОЗ расширил рамки исследований по эпидемиологии риккетсиозов и экологии риккетсий. С момента создания Справочного центра ВОЗ (СЦВОЗ) в 1981 г. лаборатория экологии риккетсий стала координатором исследований по риккетсиозам в СССР и Российской Федерации, выполняла задание ВОЗ по стан­дартизации диагностических препаратов и оказывала по­мощь в расшифровке заболеваний, подозрительных на риккетсиоз. Статус СЦВОЗ позволил лаборатории попол­нять музей культур риккетсий. По поручению ВОЗ академик И.В. Тарасевич выезжала за рубеж для выяснения эпиде­мической обстановки и оказания методической помощи в Иран и Эфиопию.

Эпидемический сыпной тиф и болезнь Брилла-Цинссера

Исследование сыпнотифозной инфекции во все времена было актуальным: принципиальное значение имел вопрос о сохранении возбудителя сыпного тифа в межэпидеми­ческий период. В 1940-1950-е гг. в нашей стране господ­ствовал взгляд на экзогенную природу повторного сыпного тифа. В этой связи поиски экологической ниши возбудителя были направлены на исследования гамазовых клещей, крыс. В результате эпидемиологических данных, отрицатель­ных поисков риккетсий Провачека среди возможных ре­зервуаров (членистоногие и теплокровные животные), а также доказательств, полученных за рубежом, практиче­ское здравоохранение обрело обоснованную концепцию о переболевшем сыпным тифом как о потенциальном источ­нике инфекции. Взгляды Павла Феликсовича были развиты и обогащены фактами в 1970-1980-е гг., по проверке до­казательств гипотезы природной очаговости сыпного тифа, высказанной Reiss-Gutfreund. Независимо от американских риккетсиологов были получены сходные результаты о том, что иксодовые клещи при кормлении на инфицированных риккетсиями Провачека овцах заражаются возбудителем, однако их организм в короткие сроки освобождается от него, и трансовариальной передачи у иксодового клеща не происходит. Кроме того, было убедительно показано, что положительные результаты исследований сывороток крови крупного и мелкого рогатого скота определялись общностью антигенного состава риккетсий Провачека и Proteus OX₁₉ [8] и не были связаны с циркуляцией риккетсий Провачека среди сельскохозяйственных животных.

Проведен цикл работ по эпидемиологии эпидемического сыпного тифа и болезни Брилла в Азербайджане и Молда­вии [9], в Смоленской [10] и Тульской областях [11], в Узбе­кистане [12].

На примере двух больших территорий (Азербайджанская и Молдавская ССР), где во время Великой Отечественной вой­ны имели место массовые заболевания сыпным тифом, был проведен сравнительный анализ эпидемиологии сыпного тифа и болезни Брилла. Условия относительного санитар­ного благополучия, приведшие к заметному снижению чис­ленности платяных вшей, обусловили преобладание болезни Брилла в общей структуре сыпнотифозной заболеваемости. Иммунная прослойка населения к сыпному тифу в изучаемых районах в основном была сформирована к началу 1950-х гг. за счет эпидемий предшествующих лет. Характерно отсут­ствие групповой заболеваемости и связей между отдельными заболеваниями, среди больных сыпным тифом преобладали люди старше 40 лет, отсутствовала зимне-весенняя сезон­ность заболеваний с превалентностью когорты угрожающих профессий [9]. Был предложен метод прогнозирования ми­нимальной ожидаемой заболеваемости сыпным тифом [10].

В 1980-е гг. сохранилась тенденция в динамике заболе­ваемости сыпным тифом [13]. В результате изучения иммуноструктуры населения ряда областей европейской части СССР было установлено, что наиболее высокие показатели уровня антител к риккетсиям Провачека имелись у людей старше 40 лет, у молодежи до 19 лет они практически не обнаруживались. Таким образом, сложилась ситуация, когда при наличии двух компонентов тифозного потенциала (тер­мин Ч. Висмэна) - потенциальных источников риккетсий Провачека в лице переболевших сыпным тифом и восприим­чивого населения, но при отсутствии переносчика механизм передачи не реализуется [11, 12].

Последние два десятилетия ХХ столетия в мире харак­теризовались ростом численности 3 видов вшей человека. Предложены новые морфологические критерии для диффе­ренциации вида платяной и головной вши, найдены отличия в кариотипе этих насекомых, что еще раз подтверждает их самостоятельный видовой статус [14, 15].

В годы перестройки с появлением беженцев и людей без определенного места жительства была отмечена трансмис­сия возбудителя сыпного тифа. В 1994 г. у детей и молодежи в возрасте 10-29 лет, проживающих в Москве и Московской области, были обнаружены антитела к R. prowazekii в вы­соких титрах [5]. Подобная ситуация происходила на фоне прогрессирующего роста педикулеза. Особенностью педику­леза было существование так называемых хронических оча­гов, которые возникают среди социально неблагополучных групп населения и чрезвычайно трудно поддаются санации. Заболеваемость педикулезом в Российской Федерации вы­росла и составила 220-300 случаев на 100 тыс. населения. Из-за отсутствия дифференцированного подхода к опреде­лению вида вшей доля платяного педикулеза неизвестна.

На фоне эпидемиологического благополучия по сыпному тифу возникла вспышка сыпного тифа в психоневрологи­ческой больнице в Липецкой области. Было зарегистриро­вано 14 больных и 15 переболевших эпидемическим сып­ным тифом. Больные женского отделения в 100% случаев были поражены платяными вшами. Клинический диагноз был подтвержден в 4 серологических реакциях. Серологи­ческое обследование пациентов и персонала показало, что при иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции непря­мой иммунофлюоресценции (РНИФ) у 37 человек были вы­явлены антитела к R. prowazekii в диагностических титрах. Вероятным источником послужила больная с рецидивом сыпного тифа, и при наличии педикулеза у других больных в больнице произошла описанная вспышка. В расследовании вспышки приняли участие сотрудники лаборатории эколо­гии риккетсий И.В. Тарасевич, А.И. Комарова, Н.Ф. Фетисова и Н.С. Умнова [16].

В 1985 г. старший научный сотрудник лаборатории эко­логии риккетсий Н.Ф. Фетисова при проведении РНИФ в 68 из 335 сывороток крови детей и подростков г. Москвы и Под­московья выявила антитела к R. prowazekii. В Каракалпак­ской автономной области Ф. Абдулаев тоже нашел антитела к R. prowazekii в сыворотках крови детей и подростков [12].

В последующие годы Российским центром по риккетсиозам серологически были выявлены единичные заболевания сыпнотифозной природы у жителей Москвы и Ульяновска.

Риккетсиозы группы клещевой пятнистой лихорадки

В группу клещевой пятнистой лихорадки (КПЛ) входят более 10 нозоформ риккетсиозов. Источниками и перенос­чиками их возбудителей являются иксодовые клещи родов Dermacentor, Haemaphysalis, Rhipicephalus, Amlyomma. Ареал каждого риккетсиоза связан с определенным родом пере­носчика, вследствие чего риккетсиозы группы КПЛ энде­мичны. Типовой вид - Rickettsia rickettsii. Первые штаммы были выделены в 1908 г. из клещей Dermacentor andersoni доктором Риккетсом в штате Монтана (США).

В бывшем СССР были зарегистрированы марсельская ли­хорадка, клещевой сыпной тиф Северной Азии (сибирский клещевой тиф - СКТ), везикулезный риккетсиоз. В России обязательной регистрации подлежат СКТ и астраханская пят­нистая лихорадка.

Ниже представлены риккетсиозы, которые изучали в ла­боратории экологии риккетсий с 1973 г. по настоящее время.

Клещевой сыпной тиф Северной Азии

В результате проведенных исследований были обобщены материалы о географии клещевого риккетсиоза и экологии R. sibirica. Были выделены территории, обладающие опреде­ленными признаками-аналогами, имеющими значение для формирования ареала R. sibirica: естественная зараженность иксодовых клещей-переносчиков и млекопитающих, под­твержденная выделением штаммов, а также обнаружением антител к R. sibirica в сыворотке крови людей, домашних животных, грызунов, птиц, учитывали наличие заболеваний людей. Документально и картографически было подтверж­дено, что наиболее опасными в отношении инфицирования человека клещевым риккетсиозом оказались те регионы, где было выявлено сочетание всех указанных признаков: Алтайский и Приморский края, южная часть Красноярского края, Новосибирская, Иркутская, Кемеровская, Читинская области, Хакасская АО, за пределами СССР северные районы Монгольской Народной Республики [6, 17].

Заболеваемость клещевым риккетсиозом резко возросла после 1979 г. С 1979 по 1995 г. выявлено 21 530 случаев бо­лезни [18]. Максимальное количество случаев было зареги­стрировано в 2001 г. - 3460. В последующие годы отмечены снижение и стабилизация показателей заболеваемости.

Была проведена работа по идентификации и дифферен­циации штаммов группы КПЛ. 22 штамма риккетсий группы КПЛ были исследованы в реакции связывания комплемента (РСК), им дана оценка с помощью антигенного коэффици­ента на основе средних геометрических показателей титров антител. Все штаммы, кроме выделенных в Армении и Чехо­словацкой Социалистической Республике (ЧССР), были иден­тичны штамму R. sibirica Нецветаев [19]. Для диагностики риккетсиозов группы КПЛ применяли группоспецифический антиген из R. sibirica.

Астраханская пятнистая лихорадка

Неизвестная ранее болезнь была выявлена местными врачами в Астраханской области в конце 1970-х - начале 1980-х гг. Число заболевших увеличивалось, был поставлен вопрос об этиологии болезни и, как следствие этого, о ее лабо­раторной диагностике и этиотропной терапии. Возбудитель -риккетсия из группы КПЛ был выделен в 1991 г. и иденти­фицирован как новый вид, позднее получивший наименова­ние R. caspiensis [20]. Штаммы R. caspiensis были выделены из крови больных, клещей Rhipicephalus pumilio, собранных с собак, кошек и ежей. Описана клиническая картина болезни, основными симптомами, как и при других риккетсиозах, пере­даваемых иксодовыми клещами, являются лихорадка, нали­чие первичного аффекта и макулопапулезной сыпи. Лечение успешно осуществляется доксициклином. Установлена при­чина заболеваемости - трансформация природного очага в антропургический в результате загрязнения внешней среды после строительства газоконденсатного комплекса, повлек­шего за собой миграцию диких грызунов и паразитирующих на них Rh. pumilio из природного очага в районы проживания людей, а также переход клещей на паразитирование на соба­ках. Результаты многолетнего изучения астраханской пятнистой лихорадки приведены в монографии И.В. Тарасевич [20] и кандидатской диссертации А.И. Ковтунова [21].

Марсельская лихорадка (средиземноморская пятнистая лихорадка) Марсельская лихорадка в СССР была выявлена А.Я. Алы­мовым [2]. В Севастополе постоянно отмечали спорадиче­ские случаи заболевания, что послужило причиной изучения потенциального очага. Исследованиями лаборатории эколо­гии риккетсий совместно с Севастопольской санитарно-эпи­демиологической станцией была выявлена следующая за­кономерность: заклещевленность собак в городе благодаря проводимым профилактическим мероприятиям снизилась с 61,7 до 1,6%, в то время как зараженность клещей риккетсиями изменилась незначительно - 25 и 16,6% положи­тельных проб (начало 1960-х и начало 1980-х гг. соответ­ственно) [1]. При исследовании клещей, собранных в старом очаге марсельской лихорадки, был выделен штамм R. conorii спустя 20 с лишним лет после первоначального выделения. Этот штамм по своим биологическим свойствам был иденти­чен эталонным штаммам марсельской лихорадки [19].

Дальневосточный клещевой риккетсиоз

Дальневосточный клещевой риккетсиоз (ДКР) описан О.Ю. Медянниковым в Хабаровском крае РФ в 2000 г. Возбу­дитель - Rickettsia heilongjiangensis идентифицирован молекулярно-генетическими методами в изолятах из крови боль­ных и клещей Haemaphysalis concinna. В некоторых регионах Сибири и Дальнего Востока ДКР (переносчик - H. concinna) распространен внутри нозоареала клещевого сыпного тифа Северной Азии. Инфекции имеют несущественные различия в клинической картине. За пределами РФ ДКР распространен в Китае и государствах Юго-Восточной Азии [22].

Болезнь кошачьей царапины

Болезнь кошачьей царапины (БКЦ) известна во многих стра­нах мира, в России официально не регистрируется. Возбуди­тель - Bartonella henselae. Ранее род Bartonella входил в семей­ство Rickettsiaceae. БКЦ - доброкачественный лимфоретикулез. Болеют главным образом дети и молодые люди, а также взрос­лые с выраженным иммунодефицитом. Источник возбудителя -инфицированная кошка. Болезнь у кошек не выражена, но воз­будитель передается по наследству. Возбудитель находится в слюне кошки и передается человеку через царапину и ранки на коже. Врачи детских больниц наблюдали заболевание, но незнание этиологии приводило к безуспешному лечению.

Лаборатория экологии риккетсий получила выписки 225 историй болезни и 373 сыворотки крови больных, подо­зрительных на БКЦ пациентов. Клинический диагноз был под­твержден серологически в РНИФ с антигенами из B. henselae штаммов Houston и Marseille. Антигены готовили из возбуди­теля, выращенного в культуре клеток. Наличие антител в сыво­ротке крови больных было подтверждено в референс-центре ВОЗ в Марселе у части пациентов. Подробное изучение и опи­сание БКЦ проведено врачами Тушинской детской городской больницы (Л.Н. Мазенкова, Т.А. Чеботарева), Морозовской детской больницы (А.Е. Анджел), инфекционной больницы № 1 г. Москвы (М.А. Сайфуллин и Л.С. Владимирова). В результате се­рологического подтверждения больным был поставлен диагноз БКЦ и назначено этиотропное лечение доксициклином [23].

Ку-лихорадка (коксиеллез, лихорадка ку, Q лихорадка) Возбудитель ку-лихорадки - Ooxiella burnetii. В 1968 г. был выведен из порядка Rickettsiales и на основании молекулярно-биологических и генетических свойств отнесен к по­рядку Legionellales [24]. По-прежнему изучается риккетсиологами. После описания ку-лихорадки в Австралии в 1936 г. она была выявлена в большинстве стран мира.

В СССР регистрируется с 1957 г. Известно несколько больших вспышек ку-лихорадки в бывшем СССР и России. Основной источник инфекции - козы, овцы, крупный ро­гатый скот. Пути передачи - аэрогенный и алиментарный. Активное изучение ку-лихорадки проводится отделом сып­ного тифа и других риккетсиозов НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи с 1950-х гг. С 1972 г. по настоящее время сотрудники лабо­ратории экологии риккетсий приняли участие в составле­нии санитарно-эпидемиологических правил СП 3.1.095-96 и СП 3.1.7.2811-10 по профилактике коксиеллеза. Оказана методическая помощь при изучении вспышек ку-лихорадки в Воронежской области, Алтайском крае, ЧССР. Выделены штаммы С. burnetii из смывов шерсти инфицированных коз в Воронежской области [25], от клещей Dermacentor в Мон­гольской Народной Республике [26]. Разработана инактивированная комбинированная вакцина против ку-лихорадки. В работе принимали участие сотрудники лаборатории эко­логии риккетсий (И.В. Тарасевич, В.А. Яблонская, С.Ф. Фаталиева) совместно с Ленинградским ИЭМ им. Л. Пастера (А.Б. Дайтер и Н.К. Токаревич) и НИИ Министерства обо­роны (Сергиев Посад). Вакцина ареактогенна, безопасна, обладает достаточной иммуногенностью, индуцирует синтез антител после однократной вакцинации. Защитные титры ан­тител определяются в 80,5-83,5% привитых и сохраняются в течение 1 года после вакцинации (срок наблюдения). Рекомендовано применение вакцины в экстремальных ус­ловиях (выписка из протокола № 7 от 27.12.2007 Комитета иммунобиологических препаратов). Рекомендовано внедре­ние в практику, которое не осуществляется из-за отсутствия финансирования.

Лихорадка цуцугамуши

Это заболевание было известно в Китае и Японии еще до нашей эры. Его интенсивное изучение начато во время и после Второй мировой войны в Японии, США. В бывшем СССР природные очаги выявлены в Приморском крае Даль­него Востока. Штаммы возбудителя - R. tsutsugamushi - вы­делены из крови больных, краснотелковых клещей - пере­носчиков и диких мелких грызунов [4]. В последующие годы природные очаги лихорадки цуцугамуши были описаны Г.П. Сомовым, И.М. Гопачено и Ф.Н. Шубиным на островах Курильской гряды.

После расследования вспышки лихорадки цуцугамуши американскими риккетсиологами в районе Сиалкот (Запад­ный Пакистан) природные очаги установлены на сопредель­ной территории Горного Таджикистана. Штаммы возбудителя выделены от краснотелковых клещей и их прокормителей, антитела к Orientia tsutsugamushi (R. tsutsugamushi) най­дены у местного населения С.Н. Назаренко, И.В. Тарасевич, Н.Ф. Фетисовой. Выделенные штаммы были близки к эталон­ному серотипу Gilliam [27].

Молекулярная биология и генетика риккетсий

Под руководством Н.М. Балаевой начато новое направ­ление исследований в России - молекулярная биология и генетика риккетсий. Были изучены белковые антигены риккетсий. При изучении суммарных белков риккетсий ме­тодом электрофореза выявляются от 19 до 175 полипепти­дов с молекулярной (мол.) массой в пределах 11-55 кДа. Их распределение в наружной (60%) и внутренней (40%) мембране риккетсий подобно распределению основных белков в мембранах типичных грамотрицательных бактерий, но отличается по величине мол. массы, которая у последних определяется в пределах 32-36 кДа [27]. Функциональное значение основных белков риккетсий не изучено. У раз­личных видов риккетсий, а также их штаммов мол. масса и электрофоретическое распределение основных и минор­ных белков имеют определенные отличия [7]. Начато изу­чение белкового состава генетически связанных штаммов R. prowazekii, малопатогенного штамма Е и его вирулент­ного ревертанта штамма ЕВир. Генетическая родственность этих штаммов подтверждена данными рестриктного анализа хромосомной ДНК, при котором показана полная идентич­ность рестриктограмм ДНК штаммов при наличии четких от­личий от рестриктограмм ДНК стандартного вирулентного штамма Брейнль риккетсий Провачека [7]. Было найдено, что штаммы Е и ЕВир, будучи идентичными по белковому составу и имея выраженное сходство со стандартным ви­рулентным штаммом Брейнль R. prowazekii, отличаются от него электрофоретической подвижностью основного белка с мол. массой 30 кДа [7]. Это единственные отличия по структурному белку между штаммами R. prowazekii. Данные об идентичности по этому белку генетически связанных, но различающихся по вирулентности штаммов свидетельствуют против предполагаемой его связи с вирулентностью возбу­дителя. Возможно, этот белок отражает штаммовые отличия R. prowazekii.

При изучении антигенов риккетсий внимание привле­чено к протективным антигенам, имеющим поверхностное расположение в оболочке и отличающимся высокой им­мунологической эффективностью [7]. Основным компо­нентом поверхностного протективного антигена риккетсий группы сыпного тифа С и пятнистой лихорадки Скалистых гор является высокомолекулярный белок с мол. массой со­ответственно 100-120 и 155 кДа. В нашей лаборатории с использованием иммуноблоттинга показана высокая иммуногенность белковых антигенов R. prowazekii, особенно основного белка с мол. массой 100-138 кДа (белок 1) для человека. В динамике инфекционного процесса у кроликов выявлены различия в иммунном ответе на белки 60 и 70 кДа при заражении малопатогенным штаммом Е и вирулент­ными штаммами ЕВир и Брейнль R. prowazekii (Еремеева М.Е. и др., 1989) [7]. Методами электронно-микроскопической иммуноцитохимии установлено, что основной белок 100 кДа локализован в капсулоподобном слое и в мембране клеточ­ной стенки R. prowazekii, что подтверждает гипотезу о су­ществовании его мембраносвязанной формы. Локализация белка 1 в капсулоподобном слое объясняет преимуществен­ное накопление антител к этому белку в сыворотках крови реконвалесцентов и позволяет ставить вопрос о его роли в патогенетическом действии R. prowazekii. Отечественные исследователи впервые перешли на уровень изучения инди­видуальных белковых антигенов R. prowazekii, выделенных в очищенном виде. Совместно с лабораторией химии антиге­нов (А.В. Родионов, М.И. Еремеева) установлено, что белок 1 штаммов Брейнль, Е, ЕВир имеет мол. массу 100 кДа, р14,22 и состоит из субъединиц. Впервые определен его аминокис­лотный состав и установлены отличия в аминосоединениях малопатогенного штамма Е и вирулентных штаммов ЕВир и Брейнль. Последнее является первым фактом установлен­ных различий в составе малопатогенного штамма Е и виру­лентных штаммов возбудителя.

С развитием молекулярной генетики и биотехнологии стало доступно изучение генома и генетики риккетсий. Уста­новлено, что мол. масса ДНК различных видов риккетсий и коксиелл составляет 1-1,5х10⁹ Да. Эта величина свиде­тельствует о том, что облигатный паразитизм, видимо, не связан с недостатком генетического материала, так как су­ществуют свободно живущие микроорганизмы с меньшим объемом генома.

С помощью разработанного способа получены антибиотикоустойчивые мутанты риккетсий при воздействии мута­геном и расширен набор спонтанных мутантов по этому при­знаку.

Структурный анализ хромосомной ДНК риккетсий по­средством рестрикционных эндонуклеаз в сочетании с ДНК-пробами оказался плодотворным для молекулярно-генетической дифференциации риккетсий различных видов. Эта техника также была эффективной для дифференциации штаммов R. prowazekii. Рестрикционный анализ ДНК для ряда штаммов R. prowazekii показал, что их рестриктограммы при большой гомологии имеют воспроизводимые различия между некоторыми штаммами, касающиеся 1-2 фрагментов в диа­пазоне 8-20 тыс. пар нуклеотидов. Совпадающие рестриктограммы имели ДНК вирулетных штаммов Брейнль, Г, Ананьев. Другую группу штаммов, имевших совпадающие рестриктограммы, составляли малопатогенный штамм Е и вирулентные штаммы ЕВир и Кацинян. Выявленные на основе полимор­физма фрагментов ДНК сходство и различие штаммов не имеют корреляции ни с формой заболевания сыпным тифом, ни с вирулентностью штамма. Обращает внимание подо­бие штаммов, изолированных в Испании (штамм Е) и Ар­мении (штамм Кацинян) - регионах одной географической широты. Другая группа штаммов также изолирована прак­тически в одном регионе Европы. В итоге исследованные к настоящему времени штаммы R. prowazekii разделились по полиморфизму фрагментов ДНК на 3 группы [7].

Разработка новых инструментов выявления риккетсий и коксиелл посредством детекции генетического материала с дальнейшим развитием метода на основе амплификации ДНК перспективна для проведения ранней диагностики риккетсиозов, альтернативной серодиагностики, изучения пато­генеза и персистенции риккетсий, а также эколого-эпидемического анализа [7].

Лабораторная диагностика

Обычно в лаборатории экологии риккетсий (Центр по риккетсиозам, РФ) используют как общепринятые методы диагностики РСК, оптимизированную за счет уменьшения объема компонентов, РНИФ, так и новые - ИФА, получение моноклональных антител к R. prowazekii. Получены автор­ские свидетельства по очистке риккетсий. Исследования по эпидемиологическому серомониторингу осуществляли антигенами, приготовленными в лаборатории экологии риккетсий, а также коммерческими препаратами. ИФА при­меняли при изучении риккетсиозов в Баку [28]. Получены моноклональные антитела к R. prowazekii и R. sibirica [29]. Разработан и запатентован (патент № 2557951) способ полу­чения мультиплексного риккетсиального диагностикума, ос­нованный на метке корпускулярных антигенов R. prowazekii и С. burnetii полупроводниковыми коллоидными наночастицами разного цвета флюоресценции [30].

Международное сотрудничество

Многолетнее плодотворное сотрудничество со Средизем­номорским университетом (Марсель, Франция) позволило выполнить ряд исследований по молекулярной биологии и генотипированию риккетсий группы КПЛ в Российской Федерации [31]. Профессор Д. Рауль принимал участие в экспедиции в природный очаг неизвестной инфекции, на­званной позднее астраханской пятнистой лихорадкой. Про­ведена идентификация возбудителя астраханской пятнистой лихорадки молекулярными методами, а также возбудителя дальневосточного клещевого риккетсиоза [31].

Наиболее значимым исследованием была идентифи­кация огромной коллекции риккетсий, выделенных на территории бывшего СССР, методами молекулярной био­логии (М.Е. Еремеева), Е.Б. Рыдкина провела работы по переносчику эпидемического сыпного тифа и изучению бартонелл [31]. Эти исследования выполнены в Средизем­номорском университете и защищены как докторские дис­сертации (PHD).

В результате серии работ, выполненных в рамках между­народного сотрудничества под руководством академика И.В. Тарасевич и профессора Д. Рауля, были получены дан­ные, позволившие полностью переоценить роль различных патогенов, вызывающих клещевые трансмиссивные забо­левания в бывшем СССР (С.Н. Шпынов, О.Ю. Медянников, М.И. Еремеева и др.).

Совместные работы в области изучения новых видов риккетсий и риккетсиозов привели к переоценке критерия видов у риккетсий (Д. Рауль, П.-Э. Фурнье, М.Е. Еремеева, И.В. Тарасевич).

Выполнены совместные исследования с Техасским уни­верситетом (Д. Волкер) и Ниигатским колледжем фарма­кологии (А. Тамура). Совместно с сотрудниками доктора А. Тамура проведены исследования очагов лихорадки цуцугамуши в Приморском крае.

В результате выполненных совместных исследований были описаны 2 новых вида риккетсий (R. raoultii, Candidatus R. tarasevichiae), изучены их экологические связи с разными родами иксодовых клещей и распространение на террито­рии РФ [31].

Консультации по серодиагностике и эпидемиологии риккетсиозов проведены в Иране, Афганистане, Монголь­ской Народной Республике, Эфиопии. Многолетний проект по эпидемиологии риккетсиозов выполнен с отделом риккетсиозов Словацкой академии наук (1968-1993), заведу­ющий отделом профессор Р. Брезина, главный исполнитель профессор Й. Ржегачек. Результаты многолетних полевых работ отражены в книге J. Rehacek и И.В. Тарасевич [32]. На протяжении длительного периода И.В. Тарасевич состо­яла членом научного комитета Европейской группы по изу­чению коксиелл, анаплазм, риккетсий и бартонелл (ESCAR) при Европейском обществе клинической микробиологии и инфекционных болезней (ESCMID). В 2015 г. И.В. Тарасевич была избрана пожизненным почетным членом Амери­канского общества по риккетсиозам (ARS).

Музей (коллекция) риккетсиальных культур

Музей был основан П.Ф. Здродовским. В настоящее время в коллекции музея хранится 154 штамма, из них 25 эталонных и 129 полевых. Штаммы представляют рода Rickettsia, Orientia, Coxiella и др. Среди них C. burtetii -25 штаммов, R. prowazekii - 24 штамма, R. sibirica - 23, R. typhi - 11, Candodatus R. tarasevichiae - 8 штаммов, R. akari и R. conorii - по 7 штаммов, R. slovaca - 6, O. tsutsugamushi - 4, R. rickettsii - 2, а также штаммы R. raoultii, R. rhipicephali, R. belli, R. japonica, R. australis, R. massillae, R. canadensis, R. montanensis, R. parkeri и других видов. В настоящее время в коллекции, имеющей статус национальной, находится 5298 единиц хранения.

Педагогическая и организационная деятельность

В результате выполнения научной тематики в лаборато­рии экологии риккетсий было защищено более 40 диссерта­ционных работ, из них 5 докторских.

НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи и Всесоюзным центром по риккетсиозам МЗ СССР было организовано и проведено 5 конфе­ренций по проблеме "Риккетсии и риккетсиозы", и в каждой из них принимали участие более 150 специалистов из науч­ных и практических учреждений страны. Материалы докла­дов были опубликованы в 8 сборниках "Риккетсии и риккет­сиозы" и отдельном сборнике, посвященном академику АМН СССР П.Ф. Здродовскому.

ЛИТЕРАТУРА

1. Кулагин С.М., Тарасевич И.В., Рубакин П.Е., Никитин А.М. и др. К вопросу о ликвидации марсельской лихорадки. Некоторые наблю­дения по марсельской лихорадке в Севастополе // Журн. микробиол. (ЖМЭИ). 1960. № 8. С. 117-121.

2. Алымов А.Я. Марсельская лихорадка в Крыму. М., 1938.

3. Здродовский П.Ф., Голиневич Е.М. Учение о риккетсиях и риккет-сиозах. 3-е изд., перераб. и доп. М. : Медицина, 1972. 496 с.

4. Кулагин С.М., Тарасевич И.В. Лихорадка цуцугамуши. М. : Меди­цина, 1972. 230 с.

5. Тарасевич И.В., Фетисова Н.Ф. Сыпной тиф // Здоровье насе­ления и среда обитания (ЗНиСО). 1995. № 2. С. 9-15.

6. Тарасевич И.В., Панфилова С.С., Фетисова Н.Ф. Экологическая гео­графия риккетсиозов группы клещевой пятнистой лихорадки // Итоги науки и техники. Сер. Медицинская география. Т. 8. М. : ВИНИТИ, 1977. 6-121.

7. Балаева Н.М., Игнатович В.Ф., Попов В.Л., Еремеева М.Е. и др. Риккетсии и риккетсиозы. М., 1990. С. 41-45.

8. Антропова Н.И. О природе и эпидемиологической оценке серо­логических реакций домашних животных к возбудителю сыпного тифа : автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 1978. 19 с.

9. Лобанов А.В. Опыт серологического изучения современного сып­ного тифа на больших территориях : автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1979. 25 с.

10. Абузярова И.А. Эпидемиология и прогнозирование болезни Бриля и сыпного тифа на примере Смоленской области : автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 1978. 19 с.

11. Додонов М.М. Серологические исследования в целях совершен­ствования эпидемиологического надзора за сыпнотифозной инфек­цией : автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 1991. 19 с.

12. Абдулаев Ф. Особенности эпидемиологии риккетсиозов в зоне экологического бедствия (Каракалпакстан) : автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1993. 28 с.

13. Тарасевич И.В., Земская А.А., Худобин В.В. К диагностике вшей рода Pediculus // Мед. паразитол. 1988. № 3. С. 153-160.

14. Худобин В.В. Диагностика видов вшей человека с применением морфометрического и кариологического анализа в системе эпиднадзора за сыпнотифозной инфекцией : автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 1991. 23 с.

15. Худобин В.В. Экологические аспекты педикулеза в условиях большого города : автореф. дис. ... д-ра мед. наук. М., 1998. 45 с.

16. Савельев С.И., Щукина И.А., Мацук В.И., Зубова Н.Ю. и др. Вспышки эпидемиологического тифа в Липецкой области // Здоровье населения и среда обитания (ЗНиСО). 1998. № 1. С. 7-11.

17. Фетисова Н.Ф. Медико-географическая оценка простран­ственной структуры ареала R. sibirica и ее значение для эпидемио­логии // Вопросы риккетсиологии. М., 1985. С. 72-74.

18. Рудаков Н.В., Самойленко И.Е., Шпынов С.Н., Решетникова Т.А. и др. Современное состояние очагов клещевого риккетсиоза // Здо­ровье населения и среда обитания (ЗНиСО). 1998. № 1. С. 12-14.

19. Макарова В.А. Вопросы идентификации риккетсий группы кле­щевой пятнистой лихорадки : автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1978. 25 с.

20. Тарасевич И.В. Астраханская пятнистая лихорадка. М. : Меди­цина, 2002. 171 с.

21. Ковтунов А.И. Эпидемиология, организация эпиднадзора и про­филактика астраханской лихорадки : автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 2000. 20 с.

22. Медянников О.Ю. Клинико-эпидемиологическая характери­стика клещевого риккетсиоза, вызываемого Rickettsiaheilongiagensis на Дальнем Востоке России : автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 2000. 23 с.

23. Тарасевич И.В., Макарова В.А., Пантюхина А.Н., Мазенкова Л.Н. и др. Болезнь кошачьей царапины // Эпидемиология и инфекц. бол. 2013. № 1. С. 70-75.

24. Weisburg W.G., Dobson M.E., Samuel J.E. et al. Phylogenetic diver­sity of rickettsiae // J. Bacteriol. 1989. Vol. 171. P. 4202-4206.

25. Друганова Л.П. Эпидемиология лихорадки Ку в Центрально-Черноземном районе : автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 1985. 24 с.

26. Тарасевич И.В., Макарова В.А. Выделение штаммов коксиелл Бернета из иксодовых клещей, собранных на территории Северной Мон­голии // Вопросы риккетсиологии. М., 1985. С. 70-80.

27. Назаренко С.И. Лихорадка цуцугамуши и лихорадка Ку в Таджикской ССР : автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1972. 18 с.

28. Кузнецова А.В. Иммуноферментный метод (ELISA) для выяв­ления антител к риккетсиям группы сыпного тифа : автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1988. 24 с.

29. Недялков Ю.А. Моноклональные антитела к Rickettsiaprowazekii и разработка на их основе высокоспецифических диагностических пре­паратов : автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 1990. 18 с.

30. Пантюхина А.Н., Тарасевич И.В., Вакштейн М.С., Дежуров С.В. Патент на изобретение № 2557951 "Способ получения мультиплексного риккетсиальногодиагностикума". Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений РФ 30.06.2015.

31. Рауль Д. Научное сотрудничество России и Франции в изучении риккетсиозов // Вестн. РАМН. 2008. № 7. С. 45-47.

32. Rehacek J., Tarasevich I.V. Acari-Borne Rickettsiae and Rickettsioses in Eurasia. Bratislava : Veda Publishing House of the Slovak Academy of Sciences, 1988.

Материалы данного сайта распространяются на условиях лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License («Атрибуция - Всемирная»)