Проект "Геном человека", созданный с целью секвенирования человеческого генома, был завершен в апреле 2003 г. [1, 2]. Эта работа расширила горизонты медицинских исследований. В 2009 г. D. Ge и соавт. [3] обнаружили нуклеотидные замены в области гена интерлейкина-28В (ИЛ-28В), кодирующего интерферон лямбда-3 (19-я хромосома). В зависимости от нуклеотидов в локусах выделены аллели C (цитозин), T (тимин), G (гуанин) и соответствующие генотипы: для аллеля rs12979860 гена ИЛ-28В - СС, СТ, ТТ, для аллеля rs8099917 - ТТ, TG, GG, при этом благоприятными вариантами для течения вирусного гепатита С (ВГС) являются СС (по сравнению с СТ и ТТ) в локусе rs12979860 и ТТ (по сравнению с TG и GG) в локусе rs8099917. Это открытие позволило прогнозировать течение хронического гепатита С (ХГС) и характер ответа на противовирусную терапию. Полиморфизм единичных нуклеотидов в аллелях rs8099917 и rs12979860 гена ИЛ-28В оказывает существенное влияние на частоту достижения стойкого вирусологического ответа у пациентов, в частности при сочетанном инфицировании ВГС и вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) [4, 5]. Доказана связь аллеля G полиморфизма rs8099917 гена ИЛ-28В с неэффективностью противовирусной терапии у моноинфицированных ВГС пациентов и при ВГС/ВИЧ-инфекции [6, 7]. Данные V. Soriano и соавт. говорят о меньшей доле пациентов - носителей генотипа СС с сочетанной ВГС/ВИЧ-инфекцией, зараженных ВГС генотипа 1, по сравнению с носителями СТ и ТТ rs12979860 (44 и 68% соответственно), тогда как генотип 3 ВГС определяли чаще среди носителей генотипа СС, а не у носителей СТ и ТТ (43 и 19%). ХГС является частым сопутствующим заболеванием при ВИЧ-инфекции - в 30-60% случаев, а у людей, внутривенно употребляющих психоактивные препараты, он может превышать 80% [8, 9], поэтому перспективным направлением является изучение взаимосвязи характера течения ВИЧ-инфекции и полиморфизма гена ИЛ-28В.
По данным W. Hou и соавт., ИЛ-28В способен ингибировать репликацию ВИЧ с помощью внутри- и внеклеточных механизмов [10]. Результаты исследований последних лет подтверждают теорию контроля течения обеих инфекций с участием ИЛ-28В [11], а также указывают на связь между полиморфизмом гена ИЛ-28В и иммунологическим ответом у ВИЧ-инфицированных пациентов на антиретровирусную терапию (АРВТ) [12]. Исследования полиморфизма гена ИЛ-28В с анализом взаимосвязи генотипов ИЛ-28В с другими факторами у больных ВИЧ-инфекцией и ВГС/ВИЧ-инфекцией, позволившие бы выработать прогностические критерии течения заболевания и ответа на лечение ВИЧ-инфекции, малочисленны, фрагментарны и неоднозначны по результатам.
Исходя из этого была определена цель данного исследования - оценка частоты распределения со сравнительной характеристикой генотипов гена ИЛ-28В у пациентов с сочетанным инфицированием ВГС и иммунодефицита человека и при моноинфицировании ВИЧ.
Материал и методы
В ретроспективное исследование были включены 65 пациентов, медиана по возрастному фактору 39 лет (см. таблицу). 1-я группа (n=44) - пациенты с сочетанной ВГС/ВИЧ-инфекцией, преимущественно мужчины (64%) с парентеральным путем инфицирования (52%), низким уровнем вирусной нагрузки (ВН) РНК ВИЧ в 82% случаев и средними показателями уровня CD4+ Т-лимфоцитов (80%); АРВТ получали 86% (n=38) пациентов [схемы АРВТ первой линии: нуклеозидный ингибитор обратной транскриптазы (НИОТ) + ненуклеозидный ингибитор обратной транскриптазы (ННИОТ) - 42% (n=16), НИОТ + ингибитор протеазы (ИП) -58% (n=22)]. 2-я группа (n=21) - моноинфицированные ВИЧ, у которых в 86% случаев инфицирование было связано с незащищенными сексуальными контактами, распределение по полу в данной группе было примерно одинаково: мужчин 43% и женщин 57%; с низким уровнем ВН РНК ВИЧ (85%) и средними значениями числа CD4+-лимфоцитов (66%), при этом среди них АРВТ получали 86% (n=18) пациентов [схемы АРВТ первой линии: НИОТ + ННИОТ - 22% (n=4), НИОТ + ИП - 78% (n=12)].
&hide_Cookie=yes)
Диагноз ВИЧ-инфекции ставили в соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами СП 3.1.5.2826-10 "Профилактика ВИЧ-инфекции", методическими рекомендациями Минздравсоцразвития России "О проведении обследования на ВИЧ-инфекцию" от 06.08.2007 (№ 5950-РХ). Сопутствующую патологию выявляли на основании анамнестических данных, анализа амбулаторных карт и консультаций специалистов на основании приказа Минздрава России от 24.12.2012 № 1511н "Об утверждении стандарта первичной медико-санитарной помощи при болезни, вызванной вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекцией)".
Диагноз ВИЧ-инфекции подтверждали при обнаружении антител к ВИЧ (суммарные антитела) методом иммуноферментного анализа с использованием наборов реагентов НПО "Диагностические системы" (Нижний Новгород). Спектр антител к антигенам ВИЧ: gpL60, gp 110/120, gp 41 (env ВИЧ-1); p55, p 40, p24/25,pL8 (gag ВИЧ-1); p68, p52, p34 (poL ВИЧ-1) определяли методом иммунного блота с использованием тест-систем New LAV Blot I производства BioRad (Франция). РНК ВИЧ и РНК ВГС (с генотипированием) в плазме периферической крови идентифицировали с помощью полимеразной цепной реакции с детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени на анализаторах COBAS TaqMan 48 (Hoffman-La-Roche, Швейцария), Abbott m2000rt (Abbott Biosystems, США). Чувствительность качественного метода полимеразной цепной реакции для обнаружения РНК ВГС составляла 150 МЕ/мл, количественного - от 15 до 200 МЕ/мл; для определения РНК ВИЧ порог составил 50-150 копий/мл.
Фенотипирование лимфоцитов осуществляли с использованием метода прямой реакции иммунофлюоресценции с моноклональными антителами (Becton Dickinson, США). Применяли BD Мультитест 6-цветный TBNK реагент (Becton Dickinson, США), содержащий моноклональные антитела CD3, CD4, CD8. Учет реакции иммунофлюоресценции осуществляли с помощью проточного цитофлюориметра FACScanto II (Becton Dickinson, США).
Для выявления полиморфизма единичных нуклеотидов в локусах rs8099917 и rs12979860 гена ИЛ-28В у пациентов применяли набор реагентов "АмплиСенс Геноскрин-IL288-FL" в лаборатории вирусных гепатитов отделения молекулярной диагностики ФБУН "Центральный научноисследовательский институт эпидемиологии" Роспотребнадзора (Москва).
Статистическую обработку данных проводили с использованием программ MS Excel 7.0, Statistica 10.0. Нормальность распределения признака в вариационном ряду определяли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Для проверки статистических гипотез о различиях относительных и абсолютных частот использовали критерий χ2, при сравнении малых чисел применяли точный критерий Фишера. Количественные показатели представлены в виде медиан (Me) с указанием 25-го и 75-го квартилей [Q1; Q3]. Гипотезу о равенстве генеральных средних в сравниваемых выборках, не подчиняющихся закону нормального распределения, проверяли с использованием непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни. При нормальном распределении признака для сравнения показателей использовали t-критерий Стьюдента. Отклонение нулевой гипотезы происходило при пороговом уровне статистической значимости p=0,05.
Результаты и обсуждение
В ходе исследования было выяснено, что среди пациентов с ВГС/ВИЧ-инфекцией частота встречаемости благоприятных вариантов генотипов СС-полиморфизма rs12979860 и ТТ-полиморфизма rs8099917 гена ИЛ-28 составила 52% (n=23, подгруппа 1А); неблагоприятные генотипы СТ и ТТ полиморфизма rs12979860 и TG и GG полиморфизма rs8099917 гена ИЛ-28В были выявлены в 48% (n=21, подгруппа 1Б) случаев. При моноинфицировании ВИЧ благоприятные варианты генотипов гена ИЛ-28В определяли у 48% (n=10, подгруппа 2А) пациентов, а неблагоприятные - у 52% (n=11, подгруппа 2Б).
В подгруппе пациентов 1А доля мужчин и женщин составляла 57 и 43% соответственно; в подгруппе 1Б -71 и 29% (p<0,05). Статистически значимых различий по гендерному составу в подгруппах 2А и 2Б не выявлено (p>0,05).
В подгруппах с неблагоприятными генотипами гена ИЛ-28В (1Б и 2Б) половой путь передачи ВИЧ чаще регистрировали среди моноинфицированных по сравнению с группой пациентов с сочетанной ВГС/ВИЧ-инфекцией (р<0,05). В группах 1А и 2А статистически значимых различий по путям передачи не выявлено (p>0,05). При сравнении групп пациентов с сочетанной ВГС/ВИЧ-инфекцией и моноинфицированных ВИЧ в зависимости от полиморфизма гена ИЛ-28В статистически значимых различий также не обнаружено (p>0,05).
Сравнительная клинико-лабораторная оценка в группах наблюдения проведена в течение 7±0,76 года.
Вторичные заболевания (туберкулез легких, кандидоз-ный стоматит) регистрировали среди моноинфицированных ВИЧ на АРВТ пациентов в 22% случаев, тогда как при сочетанной ВГС/ВИЧ-инфекции на АРВТ - 18%. Пациентов с вторичными заболеваниями чаще выявляли в группах с благоприятными генотипами гена ИЛ-28В как при сочетанной ВГС/ВИЧ-инфекции - 23%, так и при моноинфицировании ВИЧ - 25% по сравнению с группами пациентов с неблагоприятными генотипами гена ИЛ-28В при сочетанной ВГС/ ВИЧ-инфекции - 13% и при моноинфицировании ВИЧ - 20%, однако статистически значимых различий среди указанных выше групп не обнаружено (p>0,05). В группе пациентов без АРВТ (n=9) вне зависимости от полиморфизма гена ИЛ-28В в 89% случаев вторичные заболевания не выявлялись, при этом среди них ВН РНК ВИЧ была низкой либо не регистрировалась вовсе, а уровень CD4+-Т-лимфоцитов был >350 кл/мкл в 100% случаев, что не было показанием к назначению АРВТ.
Среди пациентов с ВГС/ВИЧ-инфекцией и благоприятными генотипами гена ИЛ-28В на АРВТ (n=22) медиана ВН РНК ВИЧ составила 1150 [205; 22 075] копий/мл, медиана уровня CD4+-Т-лимфоцитов - 473 [336; 637] кл/мкл. У пациентов с неблагоприятными генотипами гена ИЛ-28В на АРВТ (n=16) медиана ВН РНК ВИЧ - 6300 [324; 22 000] копий/мл CD4+-Т-лимфоцитов - 459 [337; 608] кл/мкл. Статистически значимых различий по ВН РНК ВИЧ и уровню CD4+-T-лимфоцитов между вышеуказанными группами не выявлено (p>0,05).
При оценке ВН РНК ВИЧ у моноинфицированных ВИЧ пациентов с благоприятными и неблагоприятными генотипами ИЛ-28В на АРВТ различий также не обнаружено (p>0,05), однако статистически значимое различие обнаружено по уровню CD4+-Т-лимфоцитов у пациентов с благоприятными генотипами гена ИЛ-28В на АРВТ (n=8) - 331 [274; 411] кл/мкл и неблагоприятными генотипами гена ИЛ-28В на АРВТ (n=10) - 450 [331; 623] кл/мкл (p<0,05). Достоверное различие по уровню CD4+ Т-лимфоцитов было выявлено между группой моноинфицированных ВИЧ пациентов с благоприятными генотипами гена ИЛ-28В на АРВТ и группами пациентов с ВГС/ВИЧ-инфекцией с благоприятными и неблагоприятными генотипами гена ИЛ-28В на АРВТ (р<0,05), при этом различий по уровню ВН РНК ВИЧ не обнаружено (p>0,05).
Таким образом, статистически значимые различия по частоте распределения благоприятных и неблагоприятных генотипов гена ИЛ-28В между группами с ВГС/ВИЧ-инфекцией и моноинфицированным ВИЧ не выявлены (p>0,05). Также не обнаружены различия по доле пациентов с вторичными заболеваниями в группах с сочетанной ВГС/ВИЧ-инфекцией и моноинфицированных ВИЧ на АРВТ в зависимости от полиморфизма гена ИЛ-28В (р>0,05). Однако уровень CD4+-Т-лимфоцитов был ниже в группе моноинфицированных ВИЧ пациентов на АРВТ с благоприятными вариантами генотипа СС полиморфизма rs12979860 и ТТ полиморфизма rs8099917 гена ИЛ-28 по сравнению с моноинфицированными ВИЧ на АРВТ с неблагоприятными генотипами гена ИЛ-28В и группой пациентов с ВГС/ВИЧ-инфекцией на АРВТ (p<0,05) с обоими вариантами генотипов гена ИЛ-28В.
Полученные результаты указывают на связь иммунного статуса ВИЧ-инфицированных пациентов с полиморфизмом гена ИЛ-28В, что является поводом для проведения геноти-пирования с целью предварительной оценки течения ВИЧ-инфекции, в том числе при коинфекции с ВГС.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Литература
1. Venter J.C., Adams M.D., Myers E.W., Li P.W. et al. The sequence of the human genome // Science. 2001. Vol. 291, N 5507. Р. 1304-1351.
2. International Human Genome Sequencing. Consortium Finishing the euchromatic sequence of the human genome // Nature. 2004. Vol. 431, N 7011. P. 931-945.
3. Ge D., Fellay J., Thompson A.J. Genetic variation in IL28B predicts hepatitis C treatment-induced viral clearance // Nature. 2009. Vol. 461, N 7262. P 399-401.
4. Rallon N.I., Naggie S., Benito J.M. Association of a single nucleotide polymorphism near the interleukin-28B gene with response to hepatitis C therapy in HIV/hepatitis C virus-coinfected patients // AIDS. 2010. Vol. 24, N 8. P 23-29.
5. van der Helm J., Geskus R., Sabin C. Effect of HCV infection on cause-specific mortality after HIV seroconversion, before and after 1997 // Gastroenterology. 2013. Vol. 144, N 4. P 751-760.
6. Rauch A. et al. Genetic variation in IL28 B is associated with chronic hepatitis C and treatment failure: a genome-wide association study // Gastroenterology. 2010. Vol. 138, N 4. P. 1338-1345.
7. Aparicio E. et al. IL28B SNP rs8099917 is strongly associated with pegylated interferon-alpha and ribavirin therapy treatment failure in HCV/HIV-patients // PLoS One. 2010. Vol. 5, N 10. Article ID e13771.
8. Фазылов В.Х., Манапова Э.Р., Бешимов А.Т. Определение вариантов полиморфизмов гена интерлейкина-28В у пациентов с сочетанной инфекцией ХГС/ВИЧ // Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы. 2013. № 3. С. 29-32.
9. Wandeler G. Gsponer T., Bregenzer A. Hepatitis C virus infections in the Swiss HIV cohort study: a rapidly evolving epidemic // Clin. Infect. Dis. 2012. Vol. 55, N 10. P. 1408-1416.
10. Hou W., Wang X., Ye L., Zhou L. et al. Lambda interferon inhibits human immunodeficiency virus type 1 infection of macrophages // J. Virol. 2009. Vol. 83, N 8. P. 3834-3842.
11. Machmach K., Abad-Molina C., Romero-Sanchez M.C., Abad M.A. et al. IL28B single-nucleotide polymorphism rs12979860 is associated with spontaneous HIV control in white subjects // J. Infect. Dis. 2013. Vol. 207, N 4. P. 651-655.
12. Srinidhi B.V., Sachidanantham J., Rupali P. Effect of Interleukin-28B polymorphism on Interleukin-28 expression and immunological recovery amongst HIV-1-infected individuals following antiretroviral therapy // Indian J. Med. Microbiol. 2017. Vol. 35, N 44. P. 580-584.
References
1. Venter J.C., Adams M.D., Myers E.W., Li P.W., et al. The sequence of the human genome. Science. 2001; 291 (5507): 1304-51.
2. International Human Genome Sequencing. Consortium Finishing the eu-chromatic sequence of the human genome. Nature. 2004; 431 (7011): 931-45.
3. Ge D., Fellay J., Thompson A.J. Genetic variation in IL28B predicts hepatitis C treatment-induced viral clearance. Nature. 2009; 461 (7262): 399-401.
4. Rallon N.I., Naggie S., Benito J.M. Association of a single nucleotide polymorphism near the interleukin-28B gene with response to hepatitis C therapy in HIV/hepatitis C virus-coinfected patients. AIDS. 2010; 24 (8): 23-29.
5. van der Helm J., Geskus R., Sabin C. Effect of HCV infection on cause-specific mortality after HIV seroconversion, before and after 1997. Gastroenterology. 2013; 144 (4): 751-60.
6. Rauch A., et al. Genetic variation in IL28 B is associated with chronic hepatitis C and treatment failure: a genome-wide association study. Gastroenterology. 2010; 138 (4): 1338-45.
7. Aparicio E., et al. IL28B SNP rs8099917 is strongly associated with pegylated interferon-alpha and ribavirin therapy treatment failure in HCV/ HIV-patients. PLoS One. 2010; 5 (10): e13771.
8. Fazylov V.Kh., Manapova E.R., Beshimov A.T. Determination of interleukin-28B gene polymorphic variants in patients with mixed CHC/ HIV infection. Epidemiologiya i infektsionnye bolezni. Aktual’nye voprosy [Epidemiology and Infectious Diseases. Actual Issues]. 2013; (3): 29-32. (in Russian).9. Wandeler G., Gsponer T., Bregenzer A. Hepatitis C virus infections in the Swiss HIV cohort study: a rapidly evolving epidemic. Clin Infect Dis. 2012; 55 (10): 1408-16.
10. Hou W., Wang X., Ye L., Zhou L., et al. Lambda interferon inhibits human immunodeficiency virus type 1 infection of macrophages. J Virol. 2009; 83 (8): 3834-42.
11. Machmach K., Abad-Molina C., Romero-Sanchez M.C., Abad M.A., et al. IL28B single-nucleotide polymorphism rs12979860 is associated with spontaneous HIV control in white subjects. J Infect Dis. 2013; 207 (4): 651-5.
12. Srinidhi B.V., Sachidanantham J., Rupali P. Effect of Interleukin-288 polymorphism on Interleukin-28 expression and immunological recovery amongst HIV-1-infected individuals following antiretroviral therapy. Indian J Med Microbiol. 2017; 35 (44): 580-4.